Spektrofotometr

Spektrofotometr pro měření ve viditelné oblasti elektromagnetického spektra je zařízení, které slouží k měření absorbance nebo transmitance záření o určité vlnové délce z VIS spektra, procházejícího přes roztok zkoumané látky.

Každý přístroj se liší z hlediska své konstrukce a způsobu ovládání, ale všechny mají společné tyto hlavní části: zdroj záření, monochromátor, držák na kyvetu, detektor záření, výstupní jednotka.

Obr. 1: Celkový pohled na jeden z mnoha typů VIS spektrofotometrů

Části spektrofotometru

Jako zdroj VIS záření se používá nejčastěji wolframová žárovka, poskytuje polychromatické záření o vlnových délkách v oblasti 350 – 1000nm.

Monochromátor je zařízení, které ze zdroje polychromatického záření propouští pouze záření o požadované vlnové délce. Separaci záření o určité vlnové délce lze provést průchodem přes mřížku (ohyb záření), přes hranol (lom záření) nebo přes spektrální filtry. Při použití spektrálních filtrů nezískáme přísně monochromatické záření, ale záření o vlnových délkách v úzkém rozsahu cca 10nm (např. 510 - 520nm).

Kyveta je skleněná nebo plastová hranolová nádobka o definované šířce, nejčastěji 1 – 5cm. Dvě protější stěny jsou často zmatněné, určené k manipulaci s kyvetou. Další dvě stěny se musí udržovat dokonale čisté, přes ně prochází paprsek záření při měření. Kyveta při měření obsahuje roztok zkoumané látky, příp. vztažnou kapalinu. Čím víc je zkoumaný roztok zředěný, tím širší vrstva vzorku (širší kyveta) by se pro měření měla použít, pokud přístroj tuto variabilitu umožňuje. Roztok v kyvetě nesmí obsahovat bublinky.

Obr. 2: Měřící komora s vyznačenými hlavními funkčními prvky a žlutě znázorněným směrem průchodu světelného paprsku kyvetou. Tento typ spektrofotometru umožňuje kontinuální proměření absorpčního spektra, jeho znázornění na displeji a vytisknutí. Rovněž kalibrační přímku je možné vytvořit přímo na přístroji a vytisknout ji